超高保真DNA聚合酶是一類具有極低錯配率和高擴增準確性的酶類。它們通過具備3’→5’外切酶活性,能夠校正錯誤摻入的核苷酸,確保DNA序列的忠實復制。其保真度比普通Taq DNA聚合酶高出50倍以上。
這類酶在PCR反應中起著核心作用,尤其在高通量測序等需要高準確性的實驗中,超高保真DNA聚合酶成為優(yōu)選。
1. 高保真性
- 錯配率比Taq酶(~2×10⁻⁴)低100-1000倍。
- 依賴 3'→5'外切酶活性 實時校對,切除錯誤摻入的堿基。
2. 高擴增效率
- 可擴增長片段(如Q5、PrimeSTAR GXL支持20–30 kb)。
- 耐受復雜模板(高GC含量、二級結構)。
3. 熱穩(wěn)定性
- 最適溫度通常為72–98°C(如KOD HiFi在100°C下仍穩(wěn)定)。